| 目的 基于转录组学探讨疏肝补肾法治疗卵巢早衰(prematureovarianfailure,POF)大鼠的作用机制。方法 将30只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组(n=10)、模型组(n=10)和治疗组(n=10),空白组未施加干预措施,模型组和治疗组采用慢性不可预知温和刺激法联合环磷酰胺化学诱导法建立肝郁肾虚POF大鼠模型并评价。成模后将大鼠随机平均分为模型组和治疗组,根据体表面积等效剂量折算原理,治疗组予以疏肝补肾方13.55g/(kg·d)灌胃,空白组及模型组予以等剂量生理盐水灌胃,干预周期为3周。于造模前与给药干预后监测各组大鼠体质量变化,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察卵巢组织形态学改变,并通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone,FSH)及雌二醇(estradiol,E2)水平,并采用RNA 测序(RNAsequencing,RNA-seq)筛选差异表达基因(differentiallyexpressedgenes,DEGs)。结果 造模结束后,与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P <0.01),血清FSH 含量明显升高(P <0.01),血清E2含量明显降低(P <0.01);提示造模成功。大鼠卵巢组织形态学显示,与空白组比较,模型组卵巢组织体积缩小,内部结构破坏,未成熟的闭锁卵泡数量增加,成熟卵泡较少;与模型组比较,治疗组卵巢组织体积增大,闭锁卵泡数量减少,可见较多各级卵泡。与模型组比较,治疗组卵巢指数增加(P <0.05),血清FSH 降低(P <0.01),血清E2升高(P <0.05)。空白组与模型组的转录组基因本体论(geneontology,GO)富集分析显示,DEGs主要富集于慢性应激与氧化应激调控等相关通路。模型组与治疗组的转录组分析共鉴定出81个DEGs[筛选条件:错误发现率(falsediscoveryrate,FDR)<0.005且差异倍数(|FoldChange|)>1.5],GO 功能富集分析表明DEGs主要富集于氧化还原功能通路。其中,模型组存在显著上调的致癌基因(Tk1、Kif20b、Micall2、Enpp3、MAFK)。结论 疏肝补肾法能有效调节POF大鼠性激素水平,并可能通过氧化还原途径,抑制致癌基因表达,从而改善卵泡发育环境。 |